高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、疏散系统、检测系统和数据处置惩罚系统，在手艺上流动相改为高压运送，色谱柱是以特殊的要领用小粒径的填料填充而成从而使柱效大大高于经典液相色谱，同时柱后连有高迅速度的检测器可对流出物举行一连检测。 
1.进样系统一样平常接纳隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高剖析样品的重复性是有益的。 
2.输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一样平常压强为l.47～4.4X107Pa，流速可调且稳固，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加速其在柱中的移动速率，这对提高区分率、接纳样品、坚持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随牢靠相和样品的性子而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使种种物质(纵然仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有用疏散。 
3.疏散系统该系统包括色谱柱、毗连受和恒温器等。色谱柱一样平常长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一毗连受)，内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等质料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的牢靠相(由基质和牢靠液组成).牢靠相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶组成，它们都有惰性(如硅胶外貌的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比外貌积大的特点，加之其外貌经由机械涂渍(与气相色谱中牢靠相的制备一样)，或者用化学法偶联种种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或种种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此，这类牢靠相对结构差别的物质有优异的选择性。例如，在多孔性硅胶外貌偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖卵白疏散出来。 
4.检测系统高效液相色谱仪常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。 
(1)紫外检测器该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广(如卵白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);迅速度高(检测下限为10-10g/ml);线性规模宽;对温度和流速转变不敏感;可检测梯度溶液洗脱的样品。 
(2)示差折光检测器凡具有与流动相折光率差别的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。现在，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简朴，但迅速度低(检测下限为10-7g/ml)，流动相的转变会引起折光率的转变，因此，它既不适用于痕量剖析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。 
(3)荧光检测器凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物(如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些卵白质等)的测定，其迅速度很高(检测下限为10-12～10-14g/ml)，痕量剖析和梯度洗脱作品的检测均可接纳。 
5.数据处置惩罚系统该系统可对测试数据举行收罗、贮存、显示、打印和处置惩罚等操作，使样品的疏散、制备或判断事情能准确开展。