食物中滴滴涕、六六六的残留量的测定
2011-01-01
[3126]
1 原理
样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定 ，与标准较量定量。
电子捕获检测器关于负电性强的化合物具有较高的迅速度, 使用这一特点, 可划分测出微量的六六六和滴滴涕。差别异构体和代谢物可同时划分测定。
出峰顺序：α-666、γ-666、β-666、δ-666、p,p'-DDE、o,p'-DDT、p,p'-DDD、p,p'-DDT。
2 试剂
使用的试剂一样平常系剖析纯, 有机溶剂需经重蒸馏。
2.1 丙酮。
2.2 乙醚。
2.3 95%乙醇。
2.4 石油醚: 沸程30～60℃。
2.5 苯。
2.6 无水硫酸钠。
2.7 草酸钾。
2.8 硫酸。
2.9 2%硫酸钠溶液。
2.10 过氯酸-冰乙酸混淆液:1:1。
2.11 六六六、滴滴涕标准溶液:细密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和p,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴滴、p,p'滴滴伊、o,p'-滴滴涕(α、β、γ、δ-666、p,p'-DDT、p,p'-DDD、p,p'-DDE、o,p'-DDT)各10mg,溶于苯,划分移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混匀,每毫升含农药100μg,作为贮备液存于冰箱中。
2.12 六六六、滴滴涕标准使用液:临用时各吸收2.0ml,划分移入10ml容量瓶中, 各加苯至刻度, 混匀。每毫升相当农药20μg, 此浓度适用于薄层色谱法。用气相色谱法时 ，凭证仪器迅速度还需以己烷稀释至相宜浓度 ，一样平常为0.01μg/ml。
2.13 载体: 硅藻土, 80～100目, 气相色谱用。
2.14 牢靠液:OV-17及QF-1。
3 仪器
尊龙凯时公司 GC-2001(ECD)
4 操作要领
4.1 提取
4.1.1 粮食：称取20g破损后并通过20目筛的样品 ，置于250ml具塞锥形瓶中 ，加100ml石油醚 ，于电动振荡器上振荡30min ，滤入150ml分液漏斗中 ，以20～30ml石油醚分数次洗涤残渣 ，洗液并入分液漏斗中, 以石油醚稀释至100ml。
4.1.2 蔬菜、水果: 称取200g样品 ，置于捣碎机中捣碎1～2min(若样品含水分少 ，可加一定量的水)。称取相当于原样50g的匀浆 ，加100ml丙酮,振荡lmin, 浸泡1h ，过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次10ml ，洗液并入滤液 ，置于500ml分液漏斗中 ，加80ml石油醚 ，振摇1min ，加200ml2％硫酸钠溶液 ，振摇1min ，静置分层,弃去下层。将上层石油醚液经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗,滤入另一分液漏斗中 ，再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物 ，洗液并入滤液中 ，并以石油醚稀释至100ml。
4.1.3 动物油：称取5g炼过的样品 ，溶于250ml石油醚 ，移入500ml分液漏斗中。
4.1.4 植物油：称取10g样品 ，以250ml石油醚消融 ，移入500ml分液漏斗中。
4.1.5 乳与乳制品: 称取100g鲜乳(乳制品取样量按鲜乳折算) ，移入500ml分液漏斗中。
加100ml乙醇、1g草酸钾 ，猛摇1min ，加100ml乙醚 ，摇匀。加100ml石油醚 ，猛摇2min。
静置10min ，弃去下层。将有机溶剂层经盛20g无水硫酸钠的漏斗 ，小心缓慢地滤入250ml锥形瓶中,再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物 ，洗液并入滤液中。以脂肪提取器或浓缩器蒸除有机溶剂,残渣为黄色透明油状物。再以石油醚消融 ，移入150ml分液漏斗中 ，以石油醚稀释至100ml。
4.1.6 蛋与蛋制品: 取鲜蛋10个,去壳 ，所有混匀。称取10g(蛋制品取样量按鲜蛋折算)置于250ml具塞锥形瓶中 ，加100ml丙酮 ，在电动振荡器上振荡30min ，过滤。用丙酮洗残渣数次,洗液并入滤液中用脂肪提取器或浓缩器将丙酮蒸除 ，在浓缩历程中,溶液变粘稠,常泛起泡沫 ，应小心注重不使其溢出。将残渣用50ml石油醚移入分液漏斗中。振荡,静置分层。将下层残渣放入另一分液漏斗中,加20ml石油醚,振摇,静置分层, 弃去残渣,合并石油醚 ，经盛约15g无水硫酸钠的漏斗滤入分液漏斗中 ，再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物 ，洗液并入滤液中 ，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7 种种肉类及其他动物组织
4.1.7.1 甲法: 称取纹碎混匀的20g样品 ，置于乳钵中 ，加约80g无水硫酸钠研磨 ，无水硫酸钠用量以样撇傩磨后呈干粉状为宜。将研磨后的样品和硫酸钠一并移入250ml具塞锥形瓶中 ，加100ml石油醚 ，于电动振荡器上振摇30min。抽滤 ，残渣用约100ml石油醚分数次洗涤, 洗液并入滤液中。将所有滤液用脂肪提取器或浓缩器蒸除石油醚 ，残渣为油状物。以石油醚消融残渣 ，移入150ml分液漏斗中 ，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7.2 乙法: 称取绞碎混匀的20g样品,置于烧杯中 ，加入40ml1:1过氯酸-冰乙酸混淆液,上面笼罩外貌皿 ，于80℃的水浴上消化4～5h。将上述消化液移入500ml分液漏斗中 ，以40ml水洗烧杯,洗液并入分液漏斗。以30、20、20、20ml石油醚(或环己烷)分四次从消化液中提取农药。合并石油醚(或环己烷)并使之通过高约4～5cm的无水硫酸钠小柱 ，滤入100ml容量瓶中, 以少量石油醚(或环己烷)洗小柱, 洗液并入容量瓶中, 然后稀释至刻度 ，混匀。
4.2 净化
4.2.1 于100ml样品石油醚提取液(动、植物油样品除外)中加10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后 ，将分液漏斗倒置 ，翻开活塞放气 ，然后振摇半分钟 ，静置分层。弃去下层溶液 ，上层溶液由分液漏斗上口倒至另一250ml分液漏斗中 ，用少许石油醚洗原分液漏斗后 ，并入250ml分液漏斗中 ，加100ml2％硫酸钠溶液 ，振摇后静置分层。弃去下层水溶液 ，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗过滤 ，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。洗液并入滤液中 ，以石油醚稀释至一定体积 ，供气相色谱法用�；蚪腥芤号ㄋ踔�1ml ，举行薄层色谱测定。经上述净化办法处置惩罚过的样液 ，如在测准时泛起滋扰 ，可再以硫酸处置惩罚。
4.2.2 于250ml动、植物油样品石油醚提取液中 ，加25ml硫酸。振摇数下后 ，将分液漏斗倒置,翻开活塞放气,然后振摇半分钟,静置分层,弃去下层溶液。再加25ml硫酸,振摇30s,静置分层 ，弃去下层溶液。上层溶液由分液漏斗上口倒于另一500ml分液漏斗中 ，用少许石油醚洗原分液漏斗 ，洗液并入分液漏斗中。加250ml2％硫酸钠溶液 ，摇匀 ，静置分层。以下按4.2.1“弃去下层水溶液”起依法操作。
4.3 色谱条件
4.3.1 氚源电子捕获检测器
4.3.1.1 气化室温度：190℃。
4.3.1.2 色谱柱温度: 160℃。
4.3.1.3 检测器温度: 165℃。
4.3.1.4 载气(氮气)流速：60ml/ min。
4.3.1.5 极化电压: 30V。
4.3.2 Ni63电子捕获检测器
4.3.2.1 气化室温度：215℃。
4.3.2.2 色谱柱温度：195℃。
4.3.2.3 检测器温度：225℃。
4.3.2.4 载气(氮气)流速：90ml/min。
4.3.3 色谱柱：内径3～4mm ，长1.2～2m的玻璃柱 ，内装涂以1.5％OV—17和2％QF—1的混淆牢靠液的80～100目硅藻土。
4.3.4 丈量与盘算
电子捕获检测器的线性规模狭窄 ，为了便于定量 ，选择样品进样量使之适合各组分的线性规模。凭证样品中六六六、滴滴涕保存形式 ，响应地制备各组分的标准曲线 ，从而盘算样品中的含量。
六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物含量按式(1)盘算。
A1×1000
X1 = ─────────── ................(1)
m1 × V2/V1 × 1000
式中:X1——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的简单含量,mg/kg;
A1——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的简单含量 ，ng;
V1——样品净化液体积 ，ml；
V2——样液进样体积 ，μl;
m1——样品质量 ，g。
样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定 ，与标准较量定量。
电子捕获检测器关于负电性强的化合物具有较高的迅速度, 使用这一特点, 可划分测出微量的六六六和滴滴涕。差别异构体和代谢物可同时划分测定。
出峰顺序：α-666、γ-666、β-666、δ-666、p,p'-DDE、o,p'-DDT、p,p'-DDD、p,p'-DDT。
2 试剂
使用的试剂一样平常系剖析纯, 有机溶剂需经重蒸馏。
2.1 丙酮。
2.2 乙醚。
2.3 95%乙醇。
2.4 石油醚: 沸程30～60℃。
2.5 苯。
2.6 无水硫酸钠。
2.7 草酸钾。
2.8 硫酸。
2.9 2%硫酸钠溶液。
2.10 过氯酸-冰乙酸混淆液:1:1。
2.11 六六六、滴滴涕标准溶液:细密称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和p,p'-滴滴涕、p,p'-滴滴滴、p,p'滴滴伊、o,p'-滴滴涕(α、β、γ、δ-666、p,p'-DDT、p,p'-DDD、p,p'-DDE、o,p'-DDT)各10mg,溶于苯,划分移入100ml容量瓶中,加苯至刻度, 混匀,每毫升含农药100μg,作为贮备液存于冰箱中。
2.12 六六六、滴滴涕标准使用液:临用时各吸收2.0ml,划分移入10ml容量瓶中, 各加苯至刻度, 混匀。每毫升相当农药20μg, 此浓度适用于薄层色谱法。用气相色谱法时 ，凭证仪器迅速度还需以己烷稀释至相宜浓度 ，一样平常为0.01μg/ml。
2.13 载体: 硅藻土, 80～100目, 气相色谱用。
2.14 牢靠液:OV-17及QF-1。
3 仪器
尊龙凯时公司 GC-2001(ECD)
4 操作要领
4.1 提取
4.1.1 粮食：称取20g破损后并通过20目筛的样品 ，置于250ml具塞锥形瓶中 ，加100ml石油醚 ，于电动振荡器上振荡30min ，滤入150ml分液漏斗中 ，以20～30ml石油醚分数次洗涤残渣 ，洗液并入分液漏斗中, 以石油醚稀释至100ml。
4.1.2 蔬菜、水果: 称取200g样品 ，置于捣碎机中捣碎1～2min(若样品含水分少 ，可加一定量的水)。称取相当于原样50g的匀浆 ，加100ml丙酮,振荡lmin, 浸泡1h ，过滤。残渣用丙酮洗涤三次,每次10ml ，洗液并入滤液 ，置于500ml分液漏斗中 ，加80ml石油醚 ，振摇1min ，加200ml2％硫酸钠溶液 ，振摇1min ，静置分层,弃去下层。将上层石油醚液经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗,滤入另一分液漏斗中 ，再以少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物 ，洗液并入滤液中 ，并以石油醚稀释至100ml。
4.1.3 动物油：称取5g炼过的样品 ，溶于250ml石油醚 ，移入500ml分液漏斗中。
4.1.4 植物油：称取10g样品 ，以250ml石油醚消融 ，移入500ml分液漏斗中。
4.1.5 乳与乳制品: 称取100g鲜乳(乳制品取样量按鲜乳折算) ，移入500ml分液漏斗中。
加100ml乙醇、1g草酸钾 ，猛摇1min ，加100ml乙醚 ，摇匀。加100ml石油醚 ，猛摇2min。
静置10min ，弃去下层。将有机溶剂层经盛20g无水硫酸钠的漏斗 ，小心缓慢地滤入250ml锥形瓶中,再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物 ，洗液并入滤液中。以脂肪提取器或浓缩器蒸除有机溶剂,残渣为黄色透明油状物。再以石油醚消融 ，移入150ml分液漏斗中 ，以石油醚稀释至100ml。
4.1.6 蛋与蛋制品: 取鲜蛋10个,去壳 ，所有混匀。称取10g(蛋制品取样量按鲜蛋折算)置于250ml具塞锥形瓶中 ，加100ml丙酮 ，在电动振荡器上振荡30min ，过滤。用丙酮洗残渣数次,洗液并入滤液中用脂肪提取器或浓缩器将丙酮蒸除 ，在浓缩历程中,溶液变粘稠,常泛起泡沫 ，应小心注重不使其溢出。将残渣用50ml石油醚移入分液漏斗中。振荡,静置分层。将下层残渣放入另一分液漏斗中,加20ml石油醚,振摇,静置分层, 弃去残渣,合并石油醚 ，经盛约15g无水硫酸钠的漏斗滤入分液漏斗中 ，再用少量石油醚分数次洗涤漏斗及其内容物 ，洗液并入滤液中 ，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7 种种肉类及其他动物组织
4.1.7.1 甲法: 称取纹碎混匀的20g样品 ，置于乳钵中 ，加约80g无水硫酸钠研磨 ，无水硫酸钠用量以样撇傩磨后呈干粉状为宜。将研磨后的样品和硫酸钠一并移入250ml具塞锥形瓶中 ，加100ml石油醚 ，于电动振荡器上振摇30min。抽滤 ，残渣用约100ml石油醚分数次洗涤, 洗液并入滤液中。将所有滤液用脂肪提取器或浓缩器蒸除石油醚 ，残渣为油状物。以石油醚消融残渣 ，移入150ml分液漏斗中 ，以石油醚稀释至100ml。
4.1.7.2 乙法: 称取绞碎混匀的20g样品,置于烧杯中 ，加入40ml1:1过氯酸-冰乙酸混淆液,上面笼罩外貌皿 ，于80℃的水浴上消化4～5h。将上述消化液移入500ml分液漏斗中 ，以40ml水洗烧杯,洗液并入分液漏斗。以30、20、20、20ml石油醚(或环己烷)分四次从消化液中提取农药。合并石油醚(或环己烷)并使之通过高约4～5cm的无水硫酸钠小柱 ，滤入100ml容量瓶中, 以少量石油醚(或环己烷)洗小柱, 洗液并入容量瓶中, 然后稀释至刻度 ，混匀。
4.2 净化
4.2.1 于100ml样品石油醚提取液(动、植物油样品除外)中加10ml硫酸(提取液与硫酸体积比为10:1)。振摇数下后 ，将分液漏斗倒置 ，翻开活塞放气 ，然后振摇半分钟 ，静置分层。弃去下层溶液 ，上层溶液由分液漏斗上口倒至另一250ml分液漏斗中 ，用少许石油醚洗原分液漏斗后 ，并入250ml分液漏斗中 ，加100ml2％硫酸钠溶液 ，振摇后静置分层。弃去下层水溶液 ，用滤纸吸除分液漏斗颈内外的水。然后将石油醚经盛有约15g无水硫酸钠的漏斗过滤 ，并以石油醚洗涤盛有无水硫酸钠的漏斗数次。洗液并入滤液中 ，以石油醚稀释至一定体积 ，供气相色谱法用�；蚪腥芤号ㄋ踔�1ml ，举行薄层色谱测定。经上述净化办法处置惩罚过的样液 ，如在测准时泛起滋扰 ，可再以硫酸处置惩罚。
4.2.2 于250ml动、植物油样品石油醚提取液中 ，加25ml硫酸。振摇数下后 ，将分液漏斗倒置,翻开活塞放气,然后振摇半分钟,静置分层,弃去下层溶液。再加25ml硫酸,振摇30s,静置分层 ，弃去下层溶液。上层溶液由分液漏斗上口倒于另一500ml分液漏斗中 ，用少许石油醚洗原分液漏斗 ，洗液并入分液漏斗中。加250ml2％硫酸钠溶液 ，摇匀 ，静置分层。以下按4.2.1“弃去下层水溶液”起依法操作。
4.3 色谱条件
4.3.1 氚源电子捕获检测器
4.3.1.1 气化室温度：190℃。
4.3.1.2 色谱柱温度: 160℃。
4.3.1.3 检测器温度: 165℃。
4.3.1.4 载气(氮气)流速：60ml/ min。
4.3.1.5 极化电压: 30V。
4.3.2 Ni63电子捕获检测器
4.3.2.1 气化室温度：215℃。
4.3.2.2 色谱柱温度：195℃。
4.3.2.3 检测器温度：225℃。
4.3.2.4 载气(氮气)流速：90ml/min。
4.3.3 色谱柱：内径3～4mm ，长1.2～2m的玻璃柱 ，内装涂以1.5％OV—17和2％QF—1的混淆牢靠液的80～100目硅藻土。
4.3.4 丈量与盘算
电子捕获检测器的线性规模狭窄 ，为了便于定量 ，选择样品进样量使之适合各组分的线性规模。凭证样品中六六六、滴滴涕保存形式 ，响应地制备各组分的标准曲线 ，从而盘算样品中的含量。
六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物含量按式(1)盘算。
A1×1000
X1 = ─────────── ................(1)
m1 × V2/V1 × 1000
式中:X1——样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的简单含量,mg/kg;
A1——被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的简单含量 ，ng;
V1——样品净化液体积 ，ml；
V2——样液进样体积 ，μl;
m1——样品质量 ，g。
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